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chimica:strumenti:termociclatore

TERMOCICLATORE:

E’ uno strumento essenziale per l’amplificazione del DNA mediante Polymerase Chain Reaction (PCR). E’ costituito da:

Display:permette di selezionare la temperatura e la durata di ogni step del ciclo di amplificazione; impostare il numero di cicli; creare un proprio profilo e salvare il programma personalizzato.

Blocchetto: è situato all’interno del Termociclatore e presenta dei pozzetti conici in cui vengono posizionate le microprovette da 200µl. Questo blocchetto varia di temperatura in accordo al programma impostato. Solitamente ogni reazione di amplificazione prevede:

  • 1. Separazione dei filamenti(denaturazione): I due filamenti che costituiscono la doppia elica di DNA sono divisi alla temperatura di 94/95 °C per 30/60 secondi.
  • 2. Ibridazione dei primer (appaiamento):La soluzione viene raffreddata a 30°/65°C per poter permettere l’ibridazione di entrambi i primers con un filamento di DNA. La temperatura di appaiamento dipende da composizione e lunghezza del primer.
  • 3. Sintesi del DNA (estensione):La soluzione viene scaldata a 72 °C in modo che i primer non si stacchino. L’enzima a questo punto comincia a lavorare e “allunga” entrambi i primers, polimerizzando nucleotidi, nella direzione della sequenza bersaglio.

chimica/strumenti/termociclatore.txt · Ultima modifica: 2019/09/23 14:30 (modifica esterna)