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biologia:esperienze_possibili:estrazione_dna_da_colonnine

Estrazione del DNA: Protocollo mediante kitimmagine1.jpg

Questo protocollo utilizza il “quick-DNA microprep plus kit (zymo)”, ovvero un kit acquistabile in commercio che include sia le provette che tutti i reagenti necessari. Sono stati utilizzati in parallelo due diverse tipologie di campioni, ovvero muscolo di acciuga fresco (acquistato al mercato) e pinne di pesce pettine conservate in alcol.

MATERIALE BIOLOGICO Pezzi di muscolo o pinna di pesce freschi o conservati in alcol 80%immagine3.jpg

REAGENTI Tutti inclusi nel kit

STRUMENTAZIONE

  • Forbici e pinzette metalliche
  • Micropipette di diverso volume (10-100 µl, 100 µl-1ml)
  • Centrifuga per provette da 1,5 ml

PROCEDIMENTO:

  1. prelevare un piccolo pezzo di campione (mezzo centimetro di pinna o muscolo)
  2. aggiungere:
    • 45 µl di H2O
    • 45 µl di solid tissue buffer
    • 10 µl di proteinasi
  3. per facilitare la digestione sminuzzare il campione con delle forbici e incubarlo a 55 °C per 1-3 ore
  4. aggiungere 200 µl di “genome binding buffer” ed agitare
  5. trasferire tutto nella colonnina zymo spin contenuta nella collection tube e centrifugare a 13000 rpm per 1 minuto o scartare il collection tube e inserire uno nuovo
  6. aggiungere 200 µl di DNA pre wash buffer nella colonna contenuta in una nuova collection tube e centrifugare a 13000 rpm per 1 minuto
  7. svuotare il collection tube, conservare ed aggiungere 700 µl di DNA wash buffer. Centrifugare per 1 minuto. svuotare il collection tube e aggiungere 200 µl di DNA wash buffer. Centrifugare per 1 minuto
  8. scartare il collection tube e inserire la colonnina in una microprovetta da 1,5 ml.
  9. eluire il DNA con 30 µl di H2O. Incubare per 5 minuti a temperatura ambiente.
  10. centrifugare per 1 minuto

https://files.zymoresearch.com/protocols/_d4074_quick-dna_microprep_plus_kit.pdf

biologia/esperienze_possibili/estrazione_dna_da_colonnine.txt · Ultima modifica: 2020/11/18 13:05 (modifica esterna)