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Estrazione del DNA: Protocollo mediante kit

Questo protocollo utilizza il “quick-DNA microprep plus kit (zymo)”, ovvero un kit acquistabile in commercio che include sia le provette che tutti i reagenti necessari. Sono stati utilizzati in parallelo due diverse tipologie di campioni, ovvero muscolo di acciuga fresco (acquistato al mercato) e pinne di pesce pettine conservate in alcol.

MATERIALE BIOLOGICO Pezzi di muscolo o pinna di pesce freschi o conservati in alcol 80%

REAGENTI Tutti inclusi nel kit

STRUMENTAZIONE

• Forbici e pinzette metalliche
• Micropipette di diverso volume (10-100 µl, 100 µl-1ml)
• Centrifuga per provette da 1,5 ml

PROCEDIMENTO:

1. prelevare un piccolo pezzo di campione (mezzo centimetro di pinna o muscolo)
2. aggiungere:
   • 45 µl di H2O
   • 45 µl di solid tissue buffer
   • 10 µl di proteinasi
3. per facilitare la digestione sminuzzare il campione con delle forbici e incubarlo a 55 °C per 1-3 ore
4. aggiungere 200 µl di “genome binding buffer” ed agitare
5. trasferire tutto nella colonnina zymo spin contenuta nella collection tube e centrifugare a 13000 rpm per 1 minuto o scartare il collection tube e inserire uno nuovo
6. aggiungere 200 µl di DNA pre wash buffer nella colonna contenuta in una nuova collection tube e centrifugare a 13000 rpm per 1 minuto
7. svuotare il collection tube, conservare ed aggiungere 700 µl di DNA wash buffer. Centrifugare per 1 minuto. svuotare il collection tube e aggiungere 200 µl di DNA wash buffer. Centrifugare per 1 minuto
8. scartare il collection tube e inserire la colonnina in una microprovetta da 1,5 ml.
9. eluire il DNA con 30 µl di H2O. Incubare per 5 minuti a temperatura ambiente.
10. centrifugare per 1 minuto

https://files.zymoresearch.com/protocols/_d4074_quick-dna_microprep_plus_kit.pdf