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biologia:esperienze:estrazione_del_dna_dal_kiwi

LAB2GO Scienza

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Estrazione del DNA e delle proteine istoniche dal Kiwi con separazione elettroforetica

Per questa esperienza occorrono:

1. MATERIALE BIOLOGICO

  • 2 kiwi maturi

2. REAGENTI

  • Etanolo
  • NaCl
  • H2O distillata
  • Blu di Metilene
  • Agarosio
  • Sapone per piatti
  • Glicerolo

3. STRUMENTI

4. PROCEDIMENTO

Preparazione del gel di agarosio:

  • Pesare 1g di agarosio e aggiungere 100 ml di tampone (TAE diluizione 10X)
  • Pesare la beuta contenente la soluzione, registrare la tara e porre sulla piastra riscaldante.
  • Ripesare la beuta e, nel caso in cui a seguito dell’evaporazione dell'acqua, il peso della beuta fosse meno di quello iniziale, aggiungere acqua fino a raggiungere nuovamente il peso;
  • Versare la soluzione nel lettino del supporto elettroforetico, inserire il pettinino in modo tale da formare i pozzetti per il caricamento dei campioni e lasciare che il gel solidifichi;

Estrazione del DNA:

  • Tagliare il Kiwi a pezzettini e ridurlo in poltiglia all’interno di un sacchetto di plastica;
  • Prendere due becker: nel primo aggiungere 100 ml di acqua con 3 g di NaCl, nel secondo aggiungere 3 cucchiai di sapone per piatti e 30 ml di H2O;
  • Aggiungere 10 ml di soluzione salina alla poltiglia di kiwi e agitare (i carboidrati e le proteine si separeranno dal DNA)
  • Filtrare il miscuglio con un pezzo di garza posto su un cilindro, prelevare 1 ml del filtrato e unirlo a 4 ml di H2O in una provetta. Quindi aggiungere 10 ml di etanolo;

Corsa elettroforetica:

  • Porre il lettino nella cella elettroforetica e coprirlo con il TAE;
  • Servendosi di una Gilson unire 5µl di glicerolo con 5µl di blu di metilene e 5µl di DNA;
  • Porre 10 µl di campione in un pozzetto all’interno della cella elettroforetica;
  • Impostare a 150V per 30-35 minuti;
  • Osservare.

5. Foto dell'esperienza

6. Osservazione

Durante l’esperimento,se i campioni caricati nei pozzetti fossero stati composti da DNA puro avremmo osservato la loro migrazione verso il polo positivo del campo elettroforetico. Nel nostro caso i campioni sono migrati verso il polo negativo indicando la presenza di istoni, proteine basiche cariche positivamente con funzione strutturale responsabili dell'impacchettamento del DNA nel nucleo.

biologia/esperienze/estrazione_del_dna_dal_kiwi.txt · Ultima modifica: 2019/09/23 14:30 (modifica esterna)